用5个标记，仅用流式，详尽剖析10余种细胞死亡方式

最近几年，将细胞死亡方式进一步细分为：

•I型（程序性细胞死亡，即凋亡）•II型（自噬性细胞死亡）•III型（程序性坏死）

也有另外一种方式将细胞死亡分为：

•程序性细胞死亡（PCD，体内稳态性和胚胎性）•偶发细胞死亡（ ACD，胀亡）•受调节的细胞死亡（RCD），包括细胞凋亡、坏死性凋亡、自噬、依赖性细胞死亡或过度的DNA损伤反应（简称DDR，如pH2AX磷酸H2AX组蛋白）引起的Poly（ADP-核糖）聚合酶（PARP）过度活化

这样的细分，对于理解细胞死亡的复杂性有很好的帮助。

但上述分类中，均未包括RIP1-（与受体相互作用的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1）依赖性凋亡或RIP1/RIP3/caspase-3细胞的现象，所以细胞死亡的的命名和定义还是应定期修正的。

虽然ACD和RCD的机制和检测方法不是非常完善，但在流式上还是可以进行检测的。如下图，利用Zombie、caspase-3、RIP-3、pH2AX、cleaved PARP等标记，可在流式上将细胞状态分为以下几类：

设门分析的示意图如下：

ACD和RCD途径。（A）活细胞可以在药物处理后经历早期凋亡（EAPO）或胀亡、早期凋亡，最后到晚期凋亡（LAPO），然后在细胞降解后变为胀亡或坏死表型。（B）活细胞在静息时可能表达RIP3+ve/caspase-3–ve，在坏死性凋亡时可能是RIP3high + ve / caspase-3–ve，或者是双阴性（DN）。EAPO细胞会丢失RIP3，或者如果保留，则会经历RIP1依赖性细胞凋亡（RIP1-APO）。EAPO细胞也可以RIP1+ve。（C）质膜完整性的丧失或细胞死亡导致（B）中反映的细胞表型，细胞降解形成DN群体。（B，C）活细胞和死细胞表型也可以表达pH2AX（DDR）或切割后的PARP（细胞凋亡），也可以最终同时表达两种蛋白质（D，E），从而导致两种情形：在活化caspase-3存在时使PARP的pH2AX过度活化；在没有caspase-3的时候导致依赖性细胞死亡。箭头指示的细胞群变化的方向。

参考文献：Vossenkamper A, Warnes G. Flow Cytometry Reveals the Nature of Oncotic Cells. Int J Mol Sci. 2019 Sep 6;20(18):4379. doi: 10.3390/ijms20184379. PMID: 31489916; PMCID: PMC6769836.