转染了GFP，想测胞内或核内标记，怎么办？固定容易丢失GFP

利用基因转染手段，在转基因动物的特定细胞类型或谱系中表达荧光蛋白 (FP) 是研究体内生物过程的常见方式。基因转染的效率，平时也几乎都可以用流式来验证，只需直接将细胞上机，直接检测荧光蛋白对应通道的阳性比例即可。

但是，流式检测FP转染的细胞的胞浆或核内蛋白，却在技术上具有挑战性，因为经常会出现FP信号丢失。要克服这一障碍，常用方法是首先分选出表达FP的细胞，然后进行细胞内染色。但这种方法不仅耗时，而且在细胞稀有时不切实际。

论坛内的liyingqilyq站友就提到了这个问题：胞内染色固定和破膜，是不是会使GFP失效？请问如何通过胞内染色去流式检测到GFP？

其实，在2011年这篇文献（Grupillo M, Lakomy R, Geng X, Styche A, Rudert WA, Trucco M, Fan Y. An improved intracellular staining protocol for efficient detection of nuclear proteins in YFP-expressing cells. Biotechniques. 2011 Dec;51(6):417-20. doi: 10.2144/000113780. PMID: 22150333.）中，已经帮我们摸索出了解决方案，就是：

用多聚甲醛，但是固定有技巧，需优化固定浓度和时间，见文献（https://www.future-science.com/doi/pdf/10.2144/000113780），里面提到，0.5％固定半小时以上，或1％固定15分钟以上，可保留YFP的荧光。

所以对于GFP，也是类似。稳妥起见，我个人建议可用1％固定30分钟以上。

本文来自流式中文网(flowcyto.cn)